세균 내독소 확인 및 제거

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지질다당류(LPS/Lipopolysaccharide)로도 알려진 내독소/endotoxin은 그람 음성 박테리아의 세포막 성분입니다. 단일 E. coli 세포에는 약 2백만 개의 LPS 분자가 포함되어 있으며, 이는 세포 용해 중에 용해물로 방출됩니다. 내독소는 포유동물 숙주에서 강력한 면역 반응을 개시하여 전신 염증 반응 증후군(SIRS) 및 패혈증을 유발할 수 있습니다. 내독소는 분자량의 높은 가변성으로 인해 용액에서 제거하기 어려운 경우가 많습니다. 또한 내독소는 비교적 안정적이며 온도와 pH 변화에 둔감합니다.

Endotoxin은 의료기기에서 발견되는 가장 흔한 발열원(pyrogen)으로, 혈류로 유입될 경우 출혈성 쇼크, 설사, 수막염, 발열, 박테리아 감염에 대한 저항력 변화, 혈압의 급격한 강하 및 기타 수많은 심각한 부작용을 일으킬 수 있으므로, 모든 주사제 의약품과 인체에 접촉되는 의료기기 및 이식용 의료기기는 엔도톡신 시험을 통해 제품의 발열 물질이 기준치 이하임을 보증하여야 합니다. 


1. Endotoxin 확인 방법

1) Gel Clot LAL Endotoxin Assay Kit (#L00351)

Limulus Amebocyte Lysate(LAL)은 대서양 투구게(Limulus polyphemus 혹은 Tachypleus tridentatus) 혈액 세포(amebocytes)의 혈구추출성분으로, endotoxin을 만나면 겔 상태로 변경됩니다. 즉, 시료와 LAL을 반응시켰을 때, 시료내 endotoxin이 0.25 EU/ml 이상일 경우, solution이 응고되는 원리를 이용한 정성분석입니다.

2) Chromogenic LAL Endotoxin Assay Kit (#L00350)

시료내 endotoxin이 있을 경우, Limulus Amebocyte Lysate(LAL)내의 proenzyme을 활성화시키고, 이로 하여금 substrate와 반응하여 색상을 나타내는 원리를 이용한 정량분석법 입니다.
테스트할 시료를 LAL 시약과 함께 섞어 96-well plate에 넣고 시간에 따른 컬러 변화를 측정합니다. Endotoxin이 많을수록  well의 색상이 점차 진한 노란색으로 변합니다. LAL Gel Clot 방법에 비해 검출범위가 넓습니다. (0.01–1 EU/ml)

chromogenic-endotoxin-assay

If the mean absorbance of a sample is x, the endotoxin concentration of sample will be 0.1538x+0.0064 EU/ml. Above is only an example curve show, and the OD values of standards may be different with different assays.

3) Single Tests Kit with Standard (#L00856-L00859)

Tachypleus의 Amebocyte Lysate (TAL)가 시료나 control과 바로 사용될 수 있도록 용해된 형태로 제공되어 LAL 용액에 녹이는 과정을 생략하여 1-step으로 측정합니다. 1시간의 반응 뒤, 시료내에 endotoxin이 있을 경우 용액이 gel화 됩니다. Detection 범위에 따라 4가지로 제공됩니다. (0.03 EU/ml, 0.06 EU/ml, 0.125 EU/ml and 0.25 EU/ml)


2. Endotoxin 제거 방법

1) ToxinEraser Endotoxin Removal Kit (#L00338)

내독소에 대한 친화성을 갖는 ligand는 음이온 교환 시스템에 결합되어 내독소 결합 강도를 증가시킬 수 있습니다. ToxinEraser Endotoxin Removal Kit은 변형된 Polymyxin B(PMB)의 affinity matrix를 기반으로 하며, 이를 통해 단백질, 펩타이드 및 항체와 같은 샘플에서 효율적인 내독소 제거가 가능합니다. ToxinEraser Endotoxin Removal Resin을 반복적으로 사용하면 최종 엔도톡신 수준을 0.1 EU/ml 까지 낮출 수 있습니다. 

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2) Proteus NoEndo Spin Column Kit 

Proteus kit는 gravity flow column의 우수한 분리 기능과 spin column의 속도 및 사용 편의성을 결합하여 단백질 또는 항체 수율을 저하시키지 않으면서 엔도톡신을 4-log 감소시킵니다. 독점적인 FlowGo 기술은 고품질 친화성 수지 매트릭스를 통해 시료 이동을 조절하여 내독소 제거 및 단백질 회수율을 모두 높이고, 원심분리기에서 내독소 제거를 위한 유속 제어 기능을 제공합니다.

NoEndo(마이크로) 및 NoEndo M(미니) 스핀 컬럼에는 배치 배양 챔버에서 NoEndo 수지와 샘플을 유지하는 SelfSeal 멤브레인 기술이 통합되어 있습니다. NoEndo µ는 마이크로퓨즈에 적합하며 최대 0.6ml의 시료량을 수용할 수 있으며 NoEndo M 스핀 컬럼은 최대 20ml의 시료량을 수용할 수 있습니다. 멤브레인은 샘플이 orbital mixer의 collection tube로 누출되는 것을 방지하기 위해 특별히 제작되었습니다. 원심분리 중 membrane pore가 확장되고 내독소가 없는 용출액이 collection tube로 전달됩니다. 표적 단백질, 항체 또는 도메인 항체의 손실 없이 최대의 내독소 제거를 보장합니다. 



문의 : 고마바이오텍(주) (02-579-8787)