R&D Systems FBS 제품 보관, 해동 및 냉동 매뉴얼
FBS는 장기간 안정성을 보장하고 유통 기한까지 성장 능력을 보존하기 위해 올바르게
보관 및 취급되어야 합니다. 이 프로토콜은 R&D
systems의 FBS를 보관, 해동, 냉동하는 동안 FBS의 품질을 유지하기 위해 중요한 팁을 간략하게
설명합니다. 이 팁은 다른 모든 R&D systems의
혈청 제품에도 적용됩니다.
FBS의 보관, 해동 및 냉동은 반드시 제조사가 제공하는 절차를 따라 진행해 주시기 바랍니다.
FBS 보관 방법
1.
FBS는 냉동 상태에서 가장 안정적이며 필요 시 차광 하여야
합니다. 권장하는 보관 온도는
-5˚C에서 -20˚C 사이 입니다.
[주의] -20˚C 이하에서 보관 시 플라스틱 병이 깨질 수 있습니다.
2.
해동-냉동 과정이 반복되면 혈청의 기능이 저하되고 불용성
결정이 증가하므로, 해동-냉동 과정의 반복을 피해야 합니다.
3.
성에방지 냉장고(frost-free freezer)는 반복적으로
제상 과정을 거치기 때문에 혈청이 냉동-해동 과정을 반복하게 합니다.
따라서, FBS는 성에 방지 냉장고에 보관하면 안됩니다.
FBS 해동 방법
1.
혈청을 냉동 보관 장소에서 옮긴 뒤, 실온에서 37 ˚C 사이의 항온 수조(water
bath)에서 해동 합니다.
[주의] 해동 과정 동안 혈청이 높은
염 농도에 오랜 기간 동안 노출되는 것을 방지하기 위해 냉동 혈청은 신속하게 해동해야 합니다.
2.
해동과정 동안 반복적으로 병을 저어서 점성 용질을 다시 현탁하고 염,
단백질, 지질 성분이 과도하게 결정을 이루는 것을 방지합니다.
3.
혈청이 완전히 해동되면 재빨리 항온 수조에서 옮깁니다.
4.
해동하는 동안 혈청 내의 단백질과 염이 병의 바닥에 농축되는 경향이 있으므로, 세포 배양배지를 더하거나 열불활성화(Heat inactivation)를
하기 전 혈청을 완전히 섞어줍니다.
[주의] 37 ˚C 이상에서 해동하는 것을 권장하지 않습니다.
이 과정 중 열 민감성 영양분이 분해될 수 있어, 제품의 무결성과 성능을 저해하고 결정
생성의 증가를 야기할 수 있습니다.
5.
FBS가 해동되면, 재빨리
사용하거나 1회 사용 용량으로 분주하여 다시 냉동해야 합니다.
[주의] 해동한 FBS 중 사용하지 않고 남은
부분은 냉장 온도(2에서 8 ˚C) 짧은 기간 동안 보관할 수 있습니다. 하지만, 세포주에 따라 냉장 보관된 혈청을 세포 배양배지에 사용할 수 있는 기간이 달라집니다.
6.
해동-냉동과정의 반복이나 장기간의 냉장은 안정성과 혈청의
기능을 저해합니다.
혈청의 냉동
FBS와 다른 혈청 제품은
혈청 영양분이 높은 염 농도에 오랜 시간 노출되는 것을 피하기 위해 최대한 빠르게 동결하여야 합니다. 물은
동결되는 첫 번째 혈청 성분으로 밀도가 낮아져 단백질과 염 같은 다른 혈청 성분이 용기의 바닥에 높은 농도로 축적되게 됩니다. 따라서, 느린 동결은 과도한 결정질의 침전물을 형성을 야기합니다.
프로토콜 주의사항 : 혈청제품의 침전물과 응집 물질
냉동 및 해동되었거나
열불활성된 FBS는 약간의 탁도, 응집 물질, 또는 결정질의 침전물을 포함할 수 있습니다. 이것은 혈청 제품에서
정상적인 현상이며 제품의 품질이 저하되었음을 나타내는 것은 아닙니다.
흔히 이 물질은 혈청에서
용해성 전구체 형태인 fibrinogen에서 전환된 fibrin으로
구성됩니다. R&D systems에서는 우수한 성장 특성을 지닌 고품질의 혈청을 생산하기 위해
저온에서 신속하게 혈청을 수집하고 가공합니다. 이 급속 냉동 처리 통해 일부 용해성 fibrinogen이 여과 후에도 남아 해동 과정 중에 fibrin으로
전환될 수 있습니다.
혈청에서 발견되는 침전물에는
종종 무기 혈청 성분과 단백질의 칼슘 복합체가 포함됩니다. 혈청의 지질 성분도 혈청 제품의 탁도를 유발합니다. 잘못된 해동, 빈번한 해동-냉동의
반복, 열 비활성화 그리고 어는 점 보다 높은 온도에서의 장기간 보관은 더 많은 침전물의 생성을 일으킵니다.
혈청 내 이런 물질의 존재는 성장 보조제로서의 성능에 영향을 미치지 않습니다. 이런 침전물을 제거하기 위해 혈청을 여과하는 것은 권장하지 않습니다. 여과를 하면 혈청 영양소가 유실될 수 있습니다.
