동물대체 피부시험과 피부조직 3D 배양
Skin의 구조
피부는 가장 바깥층을 구성하는 표피(Epidermis)와 신경, 분비선, 모낭, 혈관이 분포하는 피부의 중간층인 진피(Derma), 지방세포가 위치하는 피하조직(Hypodermix)의 3층으로 구성됩니다.
각질층(Stratum Corneum)은 표피 외부에 존재하며 몸의 수분손실 및 외부 미생물과 유해물질을 막는 장벽역할을 합니다. Dermatomed skin은 각질층과 표피층으로 구성된 두께 200-700um의 skin을 일컬으며, Full thickness skin은 각질층과 표피 및 진피로 구성된 두께 1-2mm의 skin을 말합니다. OECD 428 가이드라인은 피부흡수시험(skin absorption test)를 위해서는 200-400um 두께의 skin을 이용하도록 권고하고 있어, dermatomed skin의 사용이 권장됩니다.
동물대체 피부 시험
1. 피부감작성 시험 (Skin Sensitization)
피부감작 물질은 피부에 접촉하여 알레르기 반응을 일으키는 물질을 말합니다.
h-CLAT (human Cell Line Activation Test)는 인체 세포를 이용하여 피부감작물질과 비감작물질을 구분하기 위한 시험법으로, 시험물질을 인체 단핵구 백혈병 세포주인 THP-1에 반응시켰을 때 단핵구와 수지상세포가 활성화되는 것을 해당 세포의 표지 마커인 CD86과 CD54의 발현을 FACS로 확인함으로써 평가합니다. (OECD 442e)
SENS-IS는 LLNA 동물실험을 대체하는 정량평가 시험으로, 시험물질을 인공피부에 처리한 후 조직을 갈아 RNA를 추출하고, 감작에 관련된 62개의 유전자의 발현을 RT-PCR로 확인하는 시험방법입니다. (OECD 442d)
2. 피부자극성 시험 (Skin Irritation)
인공피부모델을 이용하여 원료 및 완제품에 의한 피부자극성(skin irritation)을 평가합니다. 시험샘플을 인공피부 표피에 처리한 후 세포독성 분석 결과 (MTT assay)를 확인합니다. (OECD 439)
3. 피부광독성 시험 (Skin Phototoxicity)
인공피부모델에 원료 및 완제품을 처리 후 빛에 노출시켜 광독성(skin phototoxicity)을 유발 할 수 있는 잠재성을 평가합니다. Test 샘플을 인간 표피에 처리 약 20 시간 후, 세포독성을 유발하지 않는 수준의 UVA로 추가 20 시간 조사하여, 최종적으로 세포 독성 분석 결과 (MTT assay) 를 확인합니다. (OECD 498)
인공피부 3D 배양
Keratinocyte(각질형성세포)와 fibroblast(섬유아세포)를 배양하여 3차원 인공피부 모델을 만들수 있습니다. 3D Keratinocyte Starter Kit을 이용하여 향상된 피부장벽 기능을 갖는 keratinocyte를 구현할 수 있습니다. 3D Full Thickness Starter Kit은 keratinocyte와 fibroblast를 이용하여 표피+진피층을 인공적으로 설계할 수 있습니다. Starter kit에는 각 세포의 환경에 적합한 최적의 media와 insert가 제공됩니다.
Skin 및 시험서비스 문의 : 고마바이오텍(주) (02-579-8787)